羧甲基纖維素CM-52 層析填料樹脂采用平均粒徑為50µm的顆粒型親水高分子聚合物,表面又用大分子糖鏈接枝,使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性,它在高流水下保持更高載量,同時又具有更好的分辨率。由于比表面積大,平衡和洗脫的時間也更短。它經過接枝即使是純化病毒,質粒等超大分子的物質,載量基本保持不變。本產品物理和化學穩定性好,使用壽命長,操作方便。
1、裝柱:
a、所需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣,液體好做脫氣處理。填料可直接稱量需要的量用緩沖液溶漲一小時裝柱即可。
b、在柱子下端加入 20%乙醇, 以除去柱子中的空氣, 關閉柱子出口, 在柱內保留少量的 20%乙醇。 20%乙醇容易產生氣泡,可以在里面加 1%吐溫避免氣泡產生。也可以換成純水裝柱子,但是需要把填料中的 20%乙醇也換成純水,具體的方法取需要體積的填料在抽濾漏斗上進行,也可以小心傾去填料上的 20%乙醇,再換成 5 倍體積的純水,反復沉淀去上清,5 次左右就可以用于裝柱子。
c、此填料顆粒比較細,所以一定要注意柱子要選擇合適的篩網,不能漏,也可以取點填料加到篩網上試試,如果沒有問題再將填料連續倒入柱子時,要用玻璃棒的緊靠柱子內壁引流,以減少氣泡的產生,讓填料先自然沉降到填料體積不再變化,而填料和上面的液體很好分層,上層溶液*澄清,就可以開泵用適當的流速壓柱子,填料體積不再變化后,再把轉換頭緊頂在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于裝柱子的流速。
d、在裝柱子前,填料從冰箱中取出至少要室溫放置 2-3 個小時,這樣避免裝柱子時由于溫度變化而使柱子中產生氣泡。
2、蛋白的結合:
樣品的鹽濃度和 pH 要盡量和平衡柱子的緩沖液*,鹽濃度過高或者 pH 帶低也許掛不上,所以要根據自己的樣品做適當調整。
3、蛋白的洗脫:
a、樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再配。
b、一般情況是讓目標產品結合在柱子上,用平衡液洗去雜質,再選擇一種洗脫液洗下目標產品。
c、介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質、流動相的離子強度和 pH 值。鹽濃度小,介質對樣品組分吸附較牢。用 DEAE 介質時,推薦的 pH 值是大于目標產品等電點 1 個單位。
4、再生清洗:
a、每次用完好用 0.5MNaOH 含 2M NaCl 洗 5 個床體積,再用水洗 5 個柱床體積,然后用 20%乙醇保存, 使用 3-5 次后在水洗之后再用 70%的乙醇或 30%異丙醇都含 1%吐溫洗 5 個柱床體積, 后 20%的乙醇流洗 5 個柱床體積。
b、有機溶劑和水混合很容易產生氣泡,為了避免這樣情況,可以把配好的有機溶劑在室溫放置,再使用,這樣可以避免氣泡進柱子而導致柱子不能正常使用。