轉染試劑是一種新結構類型的DNA轉染試劑。該轉染試劑為陽離子聚合物和脂質體的雜合體,具有轉染效率高、重復性好、毒性低和穩定性*的特點,目前該轉染試劑為我公司產品。轉染試劑用于哺乳動物細胞的轉染,如腫瘤細胞系(常見的細胞有HEK293,CHO,COS-1,COS-7,Hela,NIH3T3等)和原代培養的細胞以及昆蟲細胞sf9,sf21等。轉染試劑,1.0ml,可用于24孔板轉染333次或者6孔板166次轉染操作。
轉染試劑由納米高分子聚合物組成,分子內含有許多氨基,在生理PH下會發生質子化,這些質子化的氨基可以中和DNA質粒表面的負電荷,使DNA分子由伸展結構壓縮為體積相對較小的DNA粒子,并包裹在其中,使DNA免受核酸酶的降解。轉染復合物主要是通過細胞內吞作用將DNA轉移進入細胞,形成內含體,DNA從內含體釋放,進入細胞質中,再進一步進入核內轉錄、表達。通過納米技術生產出的轉染試劑在納米尺度表現出結合保護DNA能力強、毒性低的*性能。
轉染試劑的應用:
將DNA導入哺乳動物細胞和昆蟲細胞。
同病毒協同轉染難轉哺乳動物細胞,可顯著增強病毒的轉染效率。
轉染試劑的使用及效果:
將2μg無內毒素質粒DNA和4μL本產品分別稀釋到50μL溶液A中,將上述兩溶液混勻,加入到在1mL培養基中生長了18-24小時、覆蓋率達到50-80%的培養細胞中,輕搖以混勻,然后在37℃/5%CO2孵箱中培養,24-72小時后根據實驗需要進行瞬時表達分析或穩定細胞系加壓篩選。
轉染試劑主要用于哺乳動物細胞和昆蟲細胞的瞬時轉染以及穩定細胞系構建,可以將轉染實驗操作縮短到一分鐘即可完成。本產品具有下列特點:
1、本產品和質粒混合后無需室溫靜置孵育,直接轉染。
2、毒性低,轉染后細胞存活率高。
3、適合于多種常用的細胞系。
4、可直接加入含血清的細胞培養基中進行轉染,而且無需在轉染后補加血清和更換超快轉染試劑盒培養基。
5、如果實驗目的在于篩選抗藥性穩定細胞系,可以在細胞傳代后可直接進行轉染實驗,不需轉染前細胞培養時間。
6、無需在轉然后4-6小時補加血清或更換培養基。