Hygromycin B 潮霉素B(抗生素)
產品信息:
產品編號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(元) |
FS0012-1G | Hygromycin B 潮霉素B(凍干粉) | 1g | 600.00 |
FS0012-5G | Hygromycin B 潮霉素B(凍干粉) | 5g | 2400.00 |
FS0012-10G | Hygromycin B 潮霉素B(凍干粉) | 10g | 3840.00 |
FS0012-10ML | Hygromycin B (50 mg/ml) 潮霉素B(50 mg/ml) | 10ml | 680.00 |
FS0012-20ML | Hygromycin B (50 mg/ml) 潮霉素B(50 mg/ml) | 20ml | 1050.00 |
性狀/儲存 | -20℃保存(干粉),4℃保存(液體) |
產品屬性:
別名 : 濕霉素乙 效高素 潮霉素B干粉
英文名稱 : Hygromycin B
CAS : 31282-04-9
儲存條件 : -20℃
Hygromycin B 潮霉素B(抗生素)生物應用:
1) 篩選和維持培養穩定轉染Hph+載體的原核細胞或真核細胞(植物細胞和哺乳動物細胞);
2) 由于作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM),Zeocin™ 和blasticidin S聯合使用,篩選穩定轉染兩個不同載體的細胞株;
雙抗性穩定轉染細胞篩選的抗生素作用機制及抗性 | |||
抗生素 | 抗性機制 | 抗性基因 | 哺乳動物篩選濃度 |
潮霉素B | 干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀 | Hph | 200~500μg/mL |
G418 | 干擾80S核糖體功能和抑制蛋白合成 | Tn5/Tn601 | 100~1000μg/mL |
Zeocin | 摻入或者切割DNA引起細胞死亡 | Sh ble | 50~100μg/mL |
blasticidin S | 核糖體上抑制肽鍵形成 | Bsd/BSD | 3~50μg/mL |
3)抗病毒劑,由于潮霉素B選擇性滲透進入病毒感染增強通透性的細胞,而且具有抑制翻譯的功效;
4)作為驅蟲藥加入動物飼料;
應用濃度:
潮霉素B用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL,濃度需要殺滅曲線來確定。
哺乳動物細胞·200-500 μg/mL;細菌/植物細胞·100-300 μg/mL;真菌·300-1000μg/mL;
產品使用:
使用一:殺滅曲線確定殺死濃度(僅作參考,因個人檢測體系而異)
(1)往組織培養級的96孔板內加入未轉染細胞,細胞密度約50-200細胞/孔;細胞貼壁之后,往每孔加入含不同濃度(如50-1000μg/mL,至少5個濃度)潮霉素B的200μL新鮮培養基;
(2)37℃,5% CO2培養箱孵育細胞10-14天;
(3)培養5-7天后更換新的培養液,培養液內含有相應濃度的潮霉素B;
(4)10-14天后使用細胞增殖方法如MTT,CCK-8等評估細胞活力;也可以通過檢測細胞克隆數或百分比匯合率來確定毒性效應。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細胞的zui小濃度為篩選濃度。
使用二:篩選穩定轉染細胞
(1)對于貼壁細胞,直接吸去60mm培養皿內的轉染細胞培養基,然后加入含有潮霉素B的新鮮培養基5-6ml;對于懸浮細胞,無菌條件250x g,離心10min除去舊的轉染細胞培養基,然后懸浮在約5ml的含潮霉素B的新鮮培養基;
(2)5-7天后,如上方法更換含有潮霉素B的新鮮培養基;
(3)再孵育細胞5-7天;
(4)10-14天孵育后,培養體系中只含有能夠表達潮霉素B抗性表型的活細胞。因此篩選之后如步驟一,更換不含潮霉素B的新鮮培養基。