產品簡介:
產品貨號 | 產品名稱 | 規格 | 報價(元) |
FS0016-1ML | 殺稻瘟菌素S (滅瘟素10 mg/ml)(抗生素) | 1ml | 580.00 |
FS0016-5ML | 殺稻瘟菌素S (滅瘟素10 mg/ml)(抗生素) | 5ml | 2150.00 |
FS0016-10ML | 殺稻瘟菌素S (滅瘟素10 mg/ml)(抗生素) | 10ml | 3900.00 |
產品屬性:
CAS:3513-03-9
分子式:C17H27CIN8O5
分子量:458.9
純度:>95%(HPLC)
儲存條件:-20℃
別名:滅稻瘟素
產品應用:
抗性基因:目前已經克隆和測序的殺稻瘟菌素耐受基因有3種,一種是分離自產生菌Streptoverticillum sp.的乙酰基轉移酶基因bls,另外兩種是脫氨酶基因,包括從Bacillus cereus 中分離的bsr和從Aspergillus terreus 中分離的BSD 基因。Bsr和 BSD基因是常用的篩選標志,用于哺乳動物和植物細胞的基因轉移實驗,也可用于E.Coli。
應用濃度:
1)Escherichia coli
E. coli對Blasticidin S的敏感性稍差,但是轉化子對Blasticidin S具有耐受性,可以用低鹽LB培養基(pH 8)進行篩選,濃度范圍為50-100 μg/ml Blasticidin S。高的pH值可以提高Blasticidin S的活性。
2)哺乳動物細胞
哺乳動物細胞中Blasticidin S的工作濃度范圍在1-50 μg/ml。初次實驗建議通過滅殺曲線來確定佳使用濃度。
- 25-100 µg/ml in bacteria
- 1-30 µg/ml in mammalian cells
操作步驟(哺乳動物穩轉株篩選)
Blasticidin S通常使用濃度為10 μg/ml。攜帶bsr或BSD基因的質粒轉染到細胞中,在含有Blasticidin S的正常生長培養基中孵育,用于篩選穩定轉染細胞株。
(1)轉染后48h,用含有適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養基將細胞傳代(注:細胞處于活躍分裂期時抗生素工作好。細胞密度太高,抗生素效率降低。細胞分盤時覆蓋率不超過25%);
(2)每3-4天去除培養基,加入含抗生素的新鮮培養基;
(3)7天后檢測細胞集落形成。根據宿主細胞種類和轉染/篩選效率,集落形成可能需要增加一周或更久。
(4)轉移5-10個耐受克隆到35mm細胞盤中,加入選擇培養基維持培養7天。隨后用細胞毒性實驗進行檢測。
儲存條件:-20℃,避免反復凍融,有效期一年。